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同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ) 技术由AB SCIEX公司研发的一种体外同种同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。 iTRAQ技术采用4种或8种同位素编码的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,而后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。将蛋白质裂解为肽段,然后用iTRAQ试剂进行差异标记。iTRAQ试剂包括3个部分:报告基团(report group)、平衡基团(balance group)和肽反应基团(amine-specific reactive group)。报告基团相对分子质量为113-121Da(无120),因此iTRAQ 试剂可同时标记8组样品。平衡基团相对分子质量为192-184Da(无185),使得八种iTRAQ试剂分子量均为305Da,保证标记的同一肽段m/z相同。肽反应基团将iTRAQ试剂与肽段上赖氨酸及N端氨基酸残基相连,在其上报告基团通过平衡基团与反应基团相连,形成等量异位标签。由于iTRAQ试剂是等量的,即不同同位素在标记同一多肽后在第一级质谱检测,分子量完全相同,用串联质谱方法对在第一级质谱检测到前体离子(precursor ion)进行碰撞诱导解离,产物离子通过第二级质谱进行分析。在二级质谱分析过程中,报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂,质量平衡基团丢失,产生低质荷比(m/z)的报告离子。由于二级质谱可分析相对分子质量相差1的报告基团,不同报告基团离子强度的差异就代表了它所标记的多肽的相对丰度。同时,多肽内的酰胺键断裂,形成一系列b离子和y离子,得到离子片段的质量数,通过数据库查询和比较,可以鉴定出相应的蛋白质前体。
*需详细填写样品来源、含量、状态和其他信息
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